明膠酶譜試劑盒組織細胞樣本裂解液

明膠酶譜試劑盒組織細胞樣本裂解液

該細胞裂解液可用于明膠酶譜試劑盒中的組織和細胞樣本的裂解。

描述：
非變性細胞裂解液(Nondenaturing Lysis Buffer)內含非離子型去垢劑和鹽，能裂解細胞并在非變性條件下釋放胞漿蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。非變性條件下的裂解蛋白產物最大限度地保留了蛋白的特性和功能，如抗原-抗體結合能力或酶學活性，因此適宜于進行免疫共沉淀。另外，有些抗體對非變性蛋白具有更高的結合能力或只能識別非變性蛋白的抗原位點，在這種情況下，應該使用非變性細胞裂解液制備總蛋白。

儲存：
4℃保存 12個月有效
規格：
100ml  500ml
操作步驟：

制備細胞裂解產物：
1. 800g 4℃離心5分鐘收集培養細胞，而后用預冷的PBS洗滌細胞兩次。估計細胞離心后的體積（PCV,10⁶cells=~20ul, 10⁷cells =~100ul PCV）；
2. 每50～100ul PCV加入5倍體積非變性組織細胞裂解液（250~500ul）,渦旋震蕩10秒，冰浴放置20分鐘；
3. 12000g 4℃離心15分鐘，將上清轉移到新的離心管中，即得細胞總蛋白產物，
制備組織裂解產物：
1. 取50-100mg組織在冰上剪成碎片，用預冷的PBS洗滌2次離心棄去PBS；
2. 加入0.5-1ml預冷的非變性組織細胞裂解液；
3. 4℃用玻璃勻漿器勻漿20-40次，直到95％的細胞被破碎，渦旋震蕩10秒，冰浴放置20分鐘；
4. 12000g4℃離心15分鐘，將上清轉移到新的離心管中，即得組織總蛋白產物，可用于后續的免疫沉淀或者Western Blot，明膠酶譜檢測等實驗。
注意：
1. 在轉移上清液時不要吸入底部的沉淀物；
2. 在做免疫沉淀或免疫共沉淀時最好在實驗前進行蛋白的提取，以避免某些不穩定蛋白的降解；
3. 在該裂解緩沖液中未加入蛋白酶抑制劑，用戶可自行選擇進行添加。

明膠酶譜試劑盒組織細胞樣本裂解液