WB實驗代測基本過程介紹

　　WB實驗代測基本過程介紹
　　WB實驗代測，客戶只需要提供樣本，其余所有試劑均由我司提供，下面我們就做WB實驗代測的原理以及大致需要的試劑做了一個匯總。western免疫印跡是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。
　　1、獲取細胞或組織裂解物
　　1）根據檢測蛋白的位置選擇合適的裂解buffer；
　　2）選擇合適的蛋白酶抑制劑，避免蛋白降解，從而保證檢測的準確性。
　　2、蛋白定量
　　3、電泳分離蛋白質
　　4、轉膜：根據不同的檢測目的和待測蛋白的特性,選擇合適的膜類型。
　　5、封閉：去掉膜上多余的非特異性結合位點，降低背景。
　　6、一抗孵育一抗的選擇成功與否，是整個WB實驗代測成功的關鍵，選擇一抗有以下幾個注意點：
　　1）選擇適合檢測標本種屬的一抗；
　　2）選擇適用于WB實驗方法的一抗；
　　3）選擇單克隆抗體或者經過親和純化的多克隆抗體。
　　7、二抗孵育：孵育條件一般為室溫1-2小時。
　　8、底物孵育：選擇顯色或者化學發光底物。一般傾向于化學發光，靈敏度高且背景低，節省抗體用量。
　　9、結果分析和檢測：凝膠成像系統檢測或者暗室曝光到膠片。