深入蛋白純化實(shí)驗(yàn)

   固定化金屬親和層析（IMAC）是蛋白純化的常用方法，特別適用于純化多組氨酸（His）標(biāo)簽融合蛋白。金屬離子通過(guò)螯合劑（配體）固定到基質(zhì)上，與多組氨酸標(biāo)簽相互作用，有效的螯合樣品中的融合蛋白。氮川三乙酸（NTA）和亞氨基二乙酸（IDA）是商業(yè)化樹(shù)脂中經(jīng)常使用的螯合配基。怎樣選擇合適的配基和金屬離子，應(yīng)用于蛋白純化實(shí)驗(yàn)?zāi)兀?/span>

首先，我們比較一下NTA和IDA。NTA是4價(jià)結(jié)構(gòu)，IDA是3價(jià)結(jié)構(gòu)，NTA比IDA多一個(gè)羧甲基。結(jié)構(gòu)上的不同，使得NTA比IDA更穩(wěn)定，能得到更高純度的目標(biāo)蛋白。IDA更小，使得它與基質(zhì)更緊密的結(jié)合，提高了載量，但同時(shí)也導(dǎo)致了更多的非目標(biāo)蛋白的結(jié)合，但I(xiàn)DA相對(duì)便宜。

  一些還原劑會(huì)影響IDA、NTA的性能。比如DTT會(huì)使金屬離子從IMAC 樹(shù)脂上剝落，常常會(huì)使樹(shù)脂的顏色變?yōu)樽厣籈DTA對(duì)配基的影響更大。但實(shí)驗(yàn)顯示，NTA耐受各類(lèi)化學(xué)試劑的能力明顯優(yōu)于IDA。

總結(jié)起來(lái)，選用IMAC純化蛋白前，得先問(wèn)這幾個(gè)問(wèn)題：

1.蛋白純度、蛋白載量，哪個(gè)是你的目標(biāo)？

2.你的樣本中是否包含一些還原試劑如DTT或EDTA？

3.你的預(yù)算是？

   如果你只是想得到高的蛋白產(chǎn)量，對(duì)純度的要求稍微低點(diǎn)，IDA結(jié)合的樹(shù)脂可能是你正確的選擇。如果想限度的減少非特異性結(jié)合，可以使用Zn2+ 或Co2+結(jié)合樹(shù)脂。從各類(lèi)數(shù)據(jù)來(lái)看，NTA結(jié)合樹(shù)脂都表現(xiàn)出極大的*性。而Ni-NTA樹(shù)脂則相當(dāng)于His標(biāo)簽蛋白純化的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)！

  不同的樣本或許純化的條件不盡相同，但以上zui基本的原則不同樣本都是適用的。